阿苯達唑的危害及檢測目的
阿苯達唑（ABZ）又名丙硫咪唑，是苯并咪唑類驅(qū)蟲藥物，因其治療效果好、毒性小等方面的優(yōu)勢，被廣泛用于治療動物的腸道寄生蟲感染病，是目前獸醫(yī)臨床使用最廣泛藥物之一。阿苯達唑進入動物體內(nèi)后會快速代謝為阿苯達唑亞砜（ABZSO），阿苯達唑亞砜進一步轉(zhuǎn)化為阿苯達唑砜（ABZSO2），最終代謝為2-氨基阿苯達唑砜（ABZSO2-2-NH2）。因此，為監(jiān)控阿苯達唑藥物的使用情況，保障動物源性食品的安全，我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和國家市場監(jiān)督管理總局2019年發(fā)布的GB 31650-2019《食品安全國家標準食品中獸藥最大殘留限量》中明確規(guī)定了阿苯達唑在所有食品動物靶組織中的殘留標志物及殘留限量。
檢測項目：阿苯達唑、阿苯達唑亞砜、阿苯達唑砜、2-氨基阿苯達唑砜
應(yīng)用范圍：水產(chǎn)品（蝦、蟹、魚）
高效液相色譜法
方法原理：試料中殘留的阿苯達唑及代謝物，用乙酸乙酯提取，正己烷除脂，乙酸乙酯反萃取，高效液相色譜-熒光檢測器測定，外標法定量。
前處理儀器：
分析天平（感量0.01 g 和0.00001 g）；均質(zhì)機；離心機；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；氮吹儀；梨形瓶（100mL）；濾膜（有機相0.45 μm）。
檢測儀器：HPLC-FLD
試樣的制備與保存
取適量新鮮或冷凍的魚，去鱗、去皮，沿脊背取肌肉；蝦，去頭、去殼，取肌肉部分。絞碎，并使均質(zhì)。
取均質(zhì)后的供試樣品，作為供試試料。
取均質(zhì)后的空白樣品，作為空白試料。
取均質(zhì)后的空白樣品，添加適宜濃度的標準工作液，作為空白添加試料。
試料于零下20 ℃ 以下保存。
前處理方法
1.蝦、蟹類
提取：稱取試料2 g±0.02 g，于50 mL離心管中，加乙酸乙酯15 mL，均質(zhì)30 s，振蕩5 min，4000 r/min離心10 min，取上清液于100 mL梨形瓶中，殘渣備用。另取一50 mL離心管，加乙酸乙酯15 mL，清洗均質(zhì)機30 s，洗滌液于殘渣中，振蕩5 min，4000 r/min離心10 min，上清液合并至100 mL梨形瓶中，于35 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，用20 %甲醇溶液1.0 mL溶解殘渣。除脂：將上述溶液移入10 mL離心管中，再向梨形瓶中加入正己烷1 mL，洗滌，正己烷轉(zhuǎn)入離心管中，振蕩1 min，4000 r/min離心5 min，棄正己烷層液，再加入正己烷1 mL，重復(fù)操作兩次，取下層液備用。
凈化：備用液中加0.04 mol/L磷酸1 mL，混勻，加二氯甲烷1.5 mL，混合1 min，4000 r/min離心5 min，取二氯甲烷液于10 mL離心管中，再加二氯甲烷1.5 mL，重復(fù)提取兩次，合并三次二氯甲烷液于10 mL離心管中，于35 ℃氮氣吹干；用0.02 mol/L磷酸氫二鈉溶液1.0 mL溶解殘余物，加乙酸乙酯2 mL，混合1 min，4000 r/min離心5 min，將乙酸乙酯液移入另一10 mL離心管中，再向磷酸氫二鈉溶液中加乙酸乙酯2 mL，重復(fù)提取兩次，合并三次乙酸乙酯液，于40 ℃氮氣吹干，用20 %甲醇-水1.0 mL溶解殘留物，濾膜過濾，供液相色譜測定。
2.魚類
提?。悍Q取試料2 g±0.02 g，于50 mL離心管中，加乙酸乙酯15 mL，均質(zhì)30 s，振蕩5 min，4000 r/min離心10 min，取上清液于100 mL梨形瓶中，殘渣備用。另取一50 mL離心管，加乙酸乙酯15 mL，清洗均質(zhì)機30 s，將此液倒入上述殘渣中振蕩提取5 min，4000 r/min離心10 min，上清液合并至100 mL梨形瓶中，于35 ℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加入20 %甲醇溶液1.0 mL溶解殘渣。
除脂：將上述溶液移入10 mL離心管中，再向梨形瓶中加入正己烷1 mL，洗滌，正己烷轉(zhuǎn)入離心管中，振蕩1 min，4000 r/min離心5 min，去除正己烷層，再加入正己烷1 mL，依法重復(fù)操作兩次。下層溶液過0.45 μm有機相濾膜，供液相色譜測定。
國標解讀及注意事項
1.標準物質(zhì)用甲醇配成100 μg/mL的標準儲備液，在零下18 ℃以下避光保存，可使用3個月。
2.本方法中魚類的提取凈化方式為：乙酸乙酯提取兩次，正己烷除脂三次；蝦和蟹的提取凈化方式為：乙酸乙酯提取兩次，正己烷除脂三次，二氯甲烷和乙酸乙酯反萃取三次。所有基質(zhì)均相當于2 g試料上機檢測。
3.由于蝦蟹基質(zhì)中會混入蟹黃等雜質(zhì)，油脂含量高，顏色較深，所以需要通過使用二氯甲烷和乙酸乙酯進行反萃取，達到去除雜質(zhì)，提高目標物回收率的效果。
4.根據(jù)基質(zhì)中含油脂量的多少，調(diào)整正己烷除脂的次數(shù)。
5.本方法采用多次提取的方式提高目標化合物的回收率。
6.本方法使用基質(zhì)流程曲線進行定量，根據(jù)實際樣品選擇適合的基質(zhì)種類進行加標。