一、目的與要求：
1、掌握醬油、水果汁、果醬中山梨酸、苯甲酸的測(cè)定原理及方法。
二、原理：
樣品酸化后，用乙醚提取山梨酸，苯甲酸。將樣品提取液濃縮，點(diǎn)于漿酰胺薄層板上，展開(kāi),顯色后，根據(jù)薄層板上山梨酸，苯甲酸的比移值與標(biāo)準(zhǔn)比較定性，并可進(jìn)行概略定量。
三、試劑與儀器（中華試劑網(wǎng)提供）：
1、異丙醇
2、正丁醇
3、石油醚沸程：30-60℃。
4、乙醚：不含過(guò)氧化物
5、氨水
6、6N鹽酸：取100毫升鹽酸
7、無(wú)水乙醇。
8、聚酰胺粉：200目。
9、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取0.2000克山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100毫升容量瓶中，并稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于200毫克山梨酸。
10、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：精密稱取0.2000克苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100毫升容量瓶中，并稀釋至刻度，此溶液每毫升相當(dāng)于2毫克苯甲酸。
11、展開(kāi)劑
(1)正丁醇-氨K--無(wú)水乙醇(7：1：2)
(2)異丙醇-氨水-無(wú)水乙醇(7：1：2)
12、顯色劑：O.04％溴甲酚紫的50％乙醇溶液，用0.1N氫氧化鈉溶液
調(diào)至PH=8。
13、4％氯化鈉酸性溶液：于4％的氯化鈉溶液中加少量6N鹽酸酸化。
14、吹風(fēng)機(jī)。
15、層析缸。
16、玻璃板：10 X 18cm
17、微量注射器：10微升，100微升。
18、噴霧器。
四、操作方法
1、樣品提取
稱取2.5克事先混合均勻的樣品，置于25毫升帶塞量筒中，加0.5毫升6N鹽酸酸化，用15、10毫升乙醚提取兩次，每次振搖1分鐘，將上層醚提取液吸 人另一個(gè)25毫升帶塞量筒中，合并乙醚提取液。用3毫升4％氯化鈉酸性溶液洗滌兩次，靜止15分鐘，用滴管將乙醚層通過(guò)無(wú)水硫酸鈉濾人25毫升容量瓶中。 加乙醚至刻度混勻，吸取l0.0毫升乙醚提取液分兩次置于10毫升帶塞離心管中，在約40 (2的水浴上揮發(fā)干，加入0.10毫升乙醇溶解殘?jiān)瑐溆谩?/span>
2、測(cè)定
(1)聚酰胺粉板的制備：稱取1.6克聚酰胺粉，加0.4克可溶性淀粉加約重5毫升，研磨3-5分鐘，立即倒入涂布器內(nèi)制成10 X 8cm、厚度0.3mm的薄層板兩塊，于室溫干燥后保存，于80℃干燥1小時(shí)，取出，置于干燥器中保存。
(2)點(diǎn)樣：在薄層板下端2cm的基線上，用微量注射器點(diǎn)1微升，2微升樣品液，同時(shí)各點(diǎn)1微升、2微升山梨酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。
(3)展開(kāi)與顯色：將點(diǎn)樣后的薄層板放人預(yù)先盛有展開(kāi)劑[(1)或(2)]的展開(kāi)槽內(nèi)，展開(kāi)槽周圍貼有濾紙，待溶劑前沿上展至lOcm，取出揮干，噴顯色 劑、斑點(diǎn)成黃色，背景為藍(lán)色。樣品中所含有山梨酸、苯甲酸的量與標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)比較定量(山梨酸、苯甲酸的比移值依次為0.82，0.73)。
A×1000
計(jì)算： X=( A×1000)/(m×10/25×V2/V1×1000)
X：樣品中山梨酸(苯甲酸)的含量，g／kg；
A：測(cè)定用樣品液中山梨酸(苯甲酸)的含量，mg；
M：樣品質(zhì)量，g；
Vl：加入乙醇的體積，ml．，
V2：測(cè)定時(shí)點(diǎn)樣的體積，ml； ·
10：測(cè)定時(shí)吸取乙醚提取液的體積，ml；
25：樣品乙醚提取液總體積，m1。