使用液相色譜法分析電離能力比較強(qiáng)的樣品時(shí)，樣品在反相色譜柱上的保留時(shí)間很短或者根本不保留，這時(shí)要加入相應(yīng)的離子對試劑，將分析物上的離子進(jìn)行結(jié)合，形成在柱子上有保留的分子。我們使用離子對試劑將它留住。
目錄
1概念 2作用 3選擇 4選用步驟 5優(yōu)點(diǎn) 6缺點(diǎn)
概念
一、離子對試劑的定義:離子對試劑是由強(qiáng)親水離子形成，反作用于樣品分子的中性離子對。因此，可用于同時(shí)分離帶電分子和非帶電分子。
二、適用范圍:一般可適用所有色譜固定相。當(dāng)使用長鏈的離子對試劑時(shí)，如:十六烷基硫酸銨或十二烷基硫酸鈉，色譜柱將選用反相色譜柱。
三、使用濃度:離子對試劑的適用濃度短鏈離子對試劑:5×10-3mol/L 長鏈離子對試劑:5×10-4mol/L
作用
使用液相色譜法分析電離能力比較強(qiáng)的樣品時(shí)，樣品在反相色譜柱上的保留時(shí)間很短或者根本不保留，這時(shí)要加入相應(yīng)的離子對試劑，將分析物上的離子進(jìn)行結(jié)合，形成在柱子上有保留的分子。就像是一個(gè)物質(zhì)要穿色譜柱而過時(shí)，我們使用離子對試劑將它留住。
離子對試劑是在高效液相色譜法中引入了離子色譜方法的一種表現(xiàn)。它主要是作用于樣品和固定相之間的一種物質(zhì)，所以在選擇離子對試劑時(shí)，要考慮色譜柱的填料和樣品的酸堿性。
選擇
離子對試劑的種類和濃度對分離效果都有較大的影響.離子對試劑種類的選擇依賴于被分離樣品的性質(zhì).被分離溶質(zhì)是強(qiáng)酸或強(qiáng)堿,離子對試劑可以是強(qiáng)酸或強(qiáng)堿,弱堿或強(qiáng)酸,弱酸,如被分離的溶質(zhì)是弱酸或弱堿,則選用的離子對試劑必須是強(qiáng)堿或強(qiáng)酸.對于溶質(zhì)結(jié)構(gòu)性質(zhì)相差較大的混合樣品,離子對試劑種類的選擇并沒有特殊要求.離子對試劑疏水性的差別可以通過調(diào)節(jié)離子對試劑濃度和有機(jī)溶劑濃度獲得滿意的分離效果。離子對試劑用于高壓液相離子對萃取的液相色譜法分離分析強(qiáng)極性有機(jī)酸和有機(jī)堿的好方法。廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)，藥物學(xué)，和石油化工等領(lǐng)域。
一、用于酸性化合物 1、四丁基氫氧化銨(10%水溶液) 2、四丁基溴化銨3、十二烷基三甲基氯化銨
二、用于堿性化合物 1、戊烷磺酸鈉2、己烷磺酸鈉 3、庚烷磺酸鈉4、辛烷磺酸鈉5、癸烷磺酸鈉
離子對試劑是高效液相色譜專用試劑，主要分析測試有機(jī)堿類離子化合物，代替離子交換法，具有可靠的分離效果。也可用于分析多肽和蛋白質(zhì)，是制備抗靜電聚脂纖維的中間體.
常用離子對試劑
1-戊烷磺酸鈉 CAS:22767-49-3
1-己烷磺酸鈉 CAS:2832-45-3
1-庚烷磺酸鈉 CAS:22767-50-6
1-辛烷磺酸鈉 CAS:5324-84-5
1-癸烷磺酸鈉 CAS:13419-61-9
選用
步驟
1、選擇一根適合的色譜柱，常為C18柱;
2、準(zhǔn)備流動(dòng)相時(shí)僅使用HPLC級別的水和色譜級試劑;
3、選擇能給出最佳分離度的流動(dòng)相成分和濃度;
4、如果樣品中有非離子化物質(zhì)，在嘗試離子化分離之前首先優(yōu)化分離情況;
5、選擇合適的離子對系列試劑以提供相應(yīng)的離子配對:對于酸性分析物使用酸性離子對試劑;對于堿性分析物使用堿性離子對試劑;
6、通過比較選擇所得分離度最好的離子對試劑;
7、一旦離子對試劑已經(jīng)確定，調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值將分離度最大化;因?yàn)槲⑿〉膒H值改變對保留性質(zhì)和選擇性都有較大的影響，所以仔細(xì)小心的小幅度調(diào)節(jié)pH值;
8、理想狀況下，流動(dòng)相中的離子對試劑濃度應(yīng)為0.005M，但是稍微增加離子對試劑可能會(huì)稍微增加保留性質(zhì)并因此優(yōu)化分離情況。
優(yōu)點(diǎn)
在過去，帶電荷分析物的色譜分離通過離子抑制(小心調(diào)節(jié)流動(dòng)相PH值以使分析物非離子化)來達(dá)到。然而，要確定離子抑制狀態(tài)下的最佳流動(dòng)相PH值，卻往往需要額外的摸索過程。含有一個(gè)以上的可離子化成分的樣品，通常是不穩(wěn)定的。離子抑制的局限性導(dǎo)致了一種新的、更普遍適用的方法進(jìn)行可離子化物質(zhì)色譜分離的方法:離子對色譜。
離子對色譜由Gordon Schill博士于1973年建立，其方法是將離子性化合物添加到流動(dòng)相中以促使離子與帶電荷分析物形成配對離子。這些試劑由帶有可離子化終端的烷基鏈組成。當(dāng)在反相條件下用于常見的憎水性HPLC固定相時(shí)，離子對試劑可選擇性的增加帶電荷分析物的保留時(shí)間。
盡管離子交換色譜已經(jīng)成為常見的分離模式，它并非在所有情況下都起作用。較離子交換色譜，離子對色譜的優(yōu)點(diǎn)在于:
ü緩沖液制備簡單;
ü碳鏈長度選擇眾多，可用于增加保留時(shí)間、改善分離性質(zhì);
ü顯著縮短分離時(shí)間;
ü同時(shí)分離離子化和非離子化分析物;
ü有效改善峰形
缺點(diǎn)
ü對色譜柱傷害較大。離子對試劑會(huì)對色譜柱造成不可逆的傷害，離子對試劑和固定相結(jié)合產(chǎn)生不可逆吸附，進(jìn)而影響固定相活性位點(diǎn)。比如十八烷基硅膠鍵合色譜柱，離子對試劑會(huì)影響色譜柱鍵合，從而達(dá)到分析樣品的作用。這種反應(yīng)對色譜柱影響很大，而且離子對試劑很難從色譜柱上沖洗干凈，會(huì)大大縮短色譜柱的使用壽命。
ü實(shí)驗(yàn)條件不穩(wěn)定。離子對試劑的濃度與其樣品的保留時(shí)間有直接的影響，而且離子對試劑對pH值比較敏感，配制流動(dòng)相時(shí)要求精確度較高。否則直接影響實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和重現(xiàn)性